Исследование агрегации тромбоцитов

ИССЛЕДОВАНИЕ АГРЕГАЦИИ ТРОМБОЦИТОВ

Преподаватели ЦМК Лабораторная диагностика
Тарасова Л.В., Белова М.Н.

Агрегацию тромбоцитов исследуют на агрегометре с использованием индукторов агрегации. Исследование агрегации проводят на плазме, богатой тромбоцитами. Желательно использовать ПБТ, содержащую примерно 200 клеток/нл. Это требование затрудняет оценку агрегации тромбоцитов при тромбоцитопении.
Пробы помещаются в кювету агрегометра, который представляет собой оптический прибор с регистрацией проходящего света. Проба в кювете постоянно перемешивается специальной мешалкой. При формировании агрегатов повышается прозрачность плазмы и, следовательно, увеличивается поток проходящего через кювету света. Изменение светопропускания регистрируется в виде кривой.
Агрегация с АДФ
Характер агрегации тромбоцитов при индукции АДФ зависит от дозы. Как правило, при концентрации 0,5-1 мкмоль возникает обратимая агрегация, при концентрации до 5 мкмоль -двухфазная агрегация, при большей концентрации (до 10 мкмоль) - необратимая однофазная агрегация (или агрегация, при которой неразличим переход от 1-й до 2-й волны).
Если первичный ответ на АДФ не будет поддержан вторичной реакцией, то в отсутствии фибриногена происходит десенситизация рецепторов, которая приводит к дезагрегации тромбоцитов. Вторичная агрегация опосредована внутриклеточной передачей сигнала через G-белки с повышением внутриклеточной концентрации Са2+. Происходит активация простагландин-тромбоксановой системы, развивается секреция из α-гранул vWF, β-тромбоглобулина, тромбоспондина, фибронектина и других активных компонентов, развивается вторичная агрегация.

Агрегация с адреналином
Особенности агрегации с адреналином в значительной степени обусловлены концентрацией Са2+ в среде. При физиологических концентрациях Са2+ (1-2 ммоль, которая характерна для плазмы крови) адреналин не вызывает активации тромбоцитов и их агрегации. При значительном снижении Са2+ в цитратной плазме до 20-40 мкмоль адреналин вызывает дозозависимую агрегацию с экспрессией комплекса GPIIb-IIIa при первичной волне агрегации и ТХА2-опосредованную вторичную волну.
По-видимому, в условиях организма прямая адреналиновая агрегация отсутствует, что связано с относительно высокой концентрацией Са2+ в плазме и низкой концентрацией самого адреналина. Однако адреналин, очевидно, потенцирует действие других агонистов, что проявляется уже при его концентрации порядка 0,01 мкмоль. Поэтому при курении, стрессе и особенно кардиогенном шоке, когда уровень адреналина в крови повышается до 0,6 мкмоль, он становится существенным фактором внутрисосудистой агрегации тромбоцитов.

Агрегация с тромбином
Тромбин - очень сильный физиологический индуктор агрегации. Воздействие тромбина на тромбоцит опосредовано собственным рецептором и GPIbα. Стимуляция тромбинового рецептора сопровождается активацией тромбоцитов через G-белок, фосфолипазы С и включение фосфоинозитольного механизма активации. Этот путь сопровождается быстрым увеличением концентрации цитозольного Са2+ и секрецией α-гранул и электронно-плотных 5-гранул. Секретируемый из 5-гранул АДФ существенен для образования агрегатов, а выделяемые α-гранулами фибриноген, vWF, тромбоспондин - для их стабилизации. Оккупация молекулами тромбина высокоаффинных рецепторов GPIbα приводит к перестройке фосфолипидной мембраны, стимуляции ее прокоагулянтной активности и повышению аффинности GPIIb-IIIa. В результате комплексной стимуляции тромбином практически не наблюдается двухволновой агрегации.

Агрегация с арахидонатом
Арахидоновая кислота в цитратной плазме вызывает дозозависимое изменение формы тромбоцитов, первичную и вторичную агрегацию. Арахидонат активирует тромбоциты без участия специфических рецепторов, проникая внутрь клетки, активируя свои метаболиты - ПГG2, ПГН2 и тромбоксан. Эту особенность активации тромбоцитов арахидоновой кислотой используют для дифференциации нарушений, связанных с дефицитом пулов хранения и нарушениями в циклооксигеназном пути активации тромбоцитов.
Вид агрегатограммы зависит от типа и концентрации индуктора. Наиболее распространенные индукторы АДФ и адреналин используются в нескольких концентрациях. Форма агрегатограммы может быть несколько отлична на агрегометрах разных производителей, так как выводимый результат теста в определенной степени зависит от скорости и характера перемешивания, температуры, спо¬соба регистрации и некоторых других факторов.
Лекарственные средства, такие, как аспирин и другие нестероидные противовоспалительные препараты, антибиотики (3-лактамного ряда, некоторые витамины, пряности могут быть причиной нарушенной агрегации. Из вышесказанного следует, что для адекватной оценки результатов теста требуется тщательная стандартизованная подготовка больных и стандартизация протокола аналитических процедур.
Долгов В.В., Свирин П.В. Лабораторная диагностика нарушений гемостаза. - М.-Тверь: ООО «Издательство «Триада», 2005. -227 с
Март 2016