ЦМК специальности Лабораторная диагностика

ПРИНЦИПЫ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА

 

Преподаватели ЦМК Лабораторная диагностика

Тарасова Л.В., Белова М.Н.

 

Иммунодиагностические методы, применяе­мые в настоящее время, весьма многочисленны. Общим признаком для них является использова­ние иммунных агентов — антител и антигенов. В основе методов иммуноанализа лежит извест­ная иммунная реакция взаимодействия антигена с антителом. Один из этих реагентов является определяемым веществом, а другой — узнаю­щим, обладающим известной стандартной спе­цифичностью (избирательностью) по отношению к определяемому веществу. Для выявления об­разовавшихся иммунных комплексов [антиген-антитело] используется метка, с которой предва­рительно связывается узнающий компонент (антиген или антитело).

 

Реакция взаимодействия антигена с антите­лом как основа присутствует во всех методах иммуноанализа. Однако, в зависимости от того, какой из этих реагентов является определяемым веществом, а другой — узнающим, от соотноше­ния их количества, а также от характера взаи­модействия стандартного и определяемого аген­тов, иммуноаналитические методы различаются по принципу связывания. К основным принци­пам методов иммуноанализа относятся:

 1) конкурентное связывание;

 2) неконкурентное связывание;

 3) неравновесное связывание.

 

Первый принцип заключается в конкурент­ном взаимодействии между стандартным мече­ным и определяемым веществами за связывание с узнающим реагентом, который может быть связан с твердой фазой. Меченый ре­агент вносится в реакционную смесь в строго дозированном ограниченном количестве, т. к. из­быток его не позволит выявлять малые концент­рации определяемого вещества. При конкурент­ном связывании содержание определяемого ве­щества в образце обратно пропорционально количеству меченого реагента, связанного с твердой фазой.

 

Методы второго типа предназначены для опре­деления веществ, молекулы которых имеют как минимум два участка связывания (два эпитопа), и предполагают использование двух узнающих ре­агентов. Первый в избыточном (максимально воз­можном) количестве иммобилизирован на твердой фазе и связывает молекулы определяемого веще­ства, находящиеся в жидкой фазе. Второй, узнаю­щий реагент, имеет метку и связывает второй эпитоп молекулы определяемого вещества, его добав­ляют либо сразу с исследуемым образцом (одностадийная схема), либо после связывания молекул определяемого вещества с первым узна­ющим реагентом и последующей промывки (двухстадийная схема). В случае, когда определяемым веществом является антиген, — это «сэндвич»-метод. Узнающими реагентами являют­ся антитела, одни из которых, иммобилизированные на твердой фазе, специфичны к одному эпитопу, другие (меченые) — ко второму. При определении специфических антител первым уз­нающим реагентом, иммобилизированном на твердой фазе, является стандартный антиген, вто­рым (меченым) — антивидовые антитела. При неконкурентном связывании со­держание определяемого вещества в образце про­порционально количеству меченого реагента, на­ходящегося в составе сложного антиген-антитель­ного комплекса.

 

Методы третьего типа также называют одноцентровым иммунометрическим анализом и ис­пользуют главным образом для определения ве­ществ (антигенов) с молекулярной массой менее 1000 Да (имеющих одну антигенную детерми­нанту). В этих методах молекулы определяемого вещества связываются со строго определенным избытком меченых антител в жидкой фазе. Далее в систему добавляют антиген или анти­видовые антитела, иммобилизированные на твердом носителе, с целью удаления из жидкой фазы несвязавшихся антител.

 

Май  2016